13h sau khi trụ sở Umbrella dưới lòng đất bị đóng cửa, những tưởng mọi chuyện đã chấm dứt. Tập đoàn Umbrella quyết định khám phá và điều tra. Chuyên viên được phái xuống lòng đất để làm nhiệm vụ nhưng ngờ đâu, làn sóng người chết đã ập lên thành phố Raccoon.

Alice, một trong số hai người sống còn và đang mang giữ một căn bệnh dịch sinh hoá từ phần trước thì lần này cô lại tham gia vào một nhiệm vụ bất đắc dĩ để giải thoát cô bé Angela và cố gắng thoát khỏi thành phố chết người này. Tham gia cùng với Alice có Jill Valentine (do Guillory đóng), là một thành viên của tổ chức Umbrella Corp’s Elite Special Tactics and Rescue Services (S.T.A.R.S), Terri Morales (Holt), Carlos Oliviera (Fehr), L.J.(Epps), và Nicholai (Ward).